聯(lián)系人：北京星越天成科技有限公司
聯(lián)系電話：010-62416955

技術(shù)文章

超聲波破碎儀在破碎大腸桿菌時(shí)的技巧


      破碎大腸桿菌用于提取表達(dá)外源蛋白，在使用超聲波破碎儀之前，用含有1%triton-X-100的PBS懸浮，然后再破碎效果較好，1%triton-X-100的作用還是很明顯的，對(duì)
其他的一些**同樣起作用，比如鏈霉菌。
     **沉淀直接加樣品1 buffer，再加5μl的巰基乙醇，混勻，離心，煮沸10min，直接上樣，染色脫色步驟如下:將膠放入適量的染色液微波爐里加熱1min(下次適當(dāng)補(bǔ)點(diǎn)醋酸即可),將染色液換成大量的水(自來水即可)在微波爐煮10min 就可以。在表達(dá)重組蛋白后用超聲波破碎細(xì)胞，采用冰浴，400w，破2s停1s，但是不一會(huì)就產(chǎn)生大量泡沫，影響了破碎功率， pbs和tris緩沖液都是這樣，*后都是破碎不完全，而我的目的蛋白就在這些未破碎的細(xì)胞中。
1*會(huì)產(chǎn)生氣泡是因?yàn)槟愕奶筋^位置沒放好。超聲波破碎儀探頭一定要接近底部，約1cm（推薦是距底部0.5mm）。功率根據(jù)儀器不同會(huì)有所不同，但你可以觀察液面，有波動(dòng)但不要太劇烈就好。
 
2*破3s停10s，破碎20-30個(gè)循環(huán)觀察效果。

3*探頭位置擺放也要注意，聽聲音如果不對(duì)的話就要及時(shí)調(diào)整。另外可以從菌濃度方面考慮。 在使用超聲波破碎時(shí)試著加大體積,振幅*好不要超過60%.
 
4*嘗試超8s停8s,對(duì)有些菌體蛋白來說，通常方法很難散熱，導(dǎo)致蛋白變性產(chǎn)生氣泡，*好停頓時(shí)間稍長一些，這種情況多見于包涵體形式的蛋白。如果換用Branson超聲波破碎儀來進(jìn)行工作，由于熱耗較小，停頓周期可適當(dāng)減小。

京公網(wǎng)安備 11010602006204號(hào)