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生物樣品處理方式方法
生物樣品處理方式方法
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北京星越
生物科技有限公司
破碎是進(jìn)行隔離或定性
RNA
、
DNA
、蛋白質(zhì)和分析物的初期步驟?;瘜W(xué)性和機械性(物理性)破碎法都可使用,但較多樣品類型傾向使用化學(xué)性方法
(
例如:大腸桿菌及培養(yǎng)細(xì)胞
)
。然而,許多微生物、未受破壞之組織、固體標(biāo)本如種子、或大型樣品則不適用于化學(xué)性方法。針對這類有彈性的樣品,便會使用根據(jù)磨碎、剪切、敲打和振蕩為基礎(chǔ)的機械
/
物理性方法。機械
/
物理性破碎方法有機械式均質(zhì)機、手動均質(zhì)、
研磨、
超聲波破碎
、混合碾磨機、渦旋機皆為常見的工具。
這些
樣品處理
的方法雖然每日廣泛的使用,但未必被明確的了解。如同其它實驗室內(nèi)廣泛使用的方法,這些方法經(jīng)過研究人員的傳承,很少去解釋過程本身的意思。破碎和均質(zhì)對實驗的影響可能很小,但同時,所選擇的工具與方法對實驗結(jié)果亦可能有很大的影響。
可能的話,化學(xué)方法可能是優(yōu)選的方法,例如
:
使用
SDS
裂解
E. Coli
,得到分離的質(zhì)體,但此方法亦可能導(dǎo)致裂解液中有不需要的分子。化學(xué)方法對分離核酸是有效的,但使用去除劑和離液劑
(detergents and chaotropes)
使蛋白質(zhì)變性
(denature)
。相同的問題也發(fā)生在蛋白質(zhì)純化時,加入裂解酵素后,之后必須移除裂解酵素。若加入化學(xué)物質(zhì)是不切實際且無法有效運作的話,則另一個方法便是使用機械式和物理式的破碎。
機械
/
物理方式的破碎樣品包含研磨
、剪切、敲打和震動。有時候,很難分辨不同力量的差別。為了簡單起見,我們以使用的工具來分類。如
超聲波破碎
儀、高壓破碎儀、組織研磨機、組織攪拌機、
機械式均質(zhì)機、渦旋震蕩器
等。在這些工具和方法中,超聲破破碎和高壓破碎是目前比較先進(jìn)方法,使用超聲破碎和高壓破碎進(jìn)行
樣品處理
既避免了化學(xué)方**摻入不必要分子的不足,同時又能達(dá)到理想的破碎效果。事實上,美國
BRANSON
的
超聲波破碎
儀在生物細(xì)胞破碎
樣品處理
領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用,受到很多專家學(xué)者的好評。
理想的破碎**是使用一個或多個方法來達(dá)到需要的結(jié)果。實際上分離亞細(xì)胞碎片可能**步是使用剪刀切掉組織、接著使用手持式均質(zhì)機研磨,*后使用
超聲波破碎
儀分離。若任何一個步驟省略,將得到較低的結(jié)果。
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