分光光度計(jì)基礎(chǔ)知識(shí)

分光光度計(jì)基礎(chǔ)知識(shí)
　　
      分光光度計(jì)就是利用分光光度法對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器。

　　而分光光度法則是通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度，對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析。常用的波長范圍為：(1)200～400nm的紫外光區(qū),(2)400～760nm的可見光區(qū),(3)2.5～25μm(按波數(shù)計(jì)為4000cm<-1>～400cm<-1>)的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外分光光度計(jì)、可見光分光光度計(jì)(或比色計(jì))、紅外分光光度計(jì)或原子吸收分光光度計(jì)。為保證測量的精密度和準(zhǔn)確度，所有儀器應(yīng)按照國家計(jì)量檢定規(guī)程或本附錄規(guī)定，定期進(jìn)行校正檢定。單色光輻射穿過被測物質(zhì)溶液時(shí)，被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比，其關(guān)系如下式： 1 A=log ─=ECL T 式中 A 為吸收度； T 為透光率； E 為吸收系數(shù)，采用的表示方法是(E1％1cm),即吸收度換算成溶液濃度為1％(g/ml)，液層厚度為1cm的數(shù)值； C為100ml溶液中所含被測物質(zhì)的重量，g(按干燥品或無水物計(jì)算)； L 為液層厚度 ，cm。物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收波長，以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當(dāng)已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后,可用同樣條件將該供試品配成溶液，測定其吸收度,即可由上式計(jì)算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見光區(qū)，除某些物質(zhì)對(duì)光有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒有吸收,但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。由于顯色時(shí)影響呈色深淺的因素較多，且常使用單色光純度較差的儀器，故測定時(shí)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吠瑫r(shí)操作。

　　分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。常用于核酸，蛋白定量以及**生長濃度的定量。